<br />في اطار السعي لتحقيق اهداف التنمية المستدامة وخصوصا الهدف الرابع التعليم الجيد<br />مقالة بعنوان : دراسة جزيئية على جينات acrAB وoqxAB وmarA لبكتيريا الإشريكية القولونية<br /><br />تُعتبر الإشريكية القولونية أكثر أنواع البكتيريا سلبية الغرام شيوعًا، وتُعرف بأنها مُمرضة انتهازية. تُمثل سلالات الإشريكية القولونية أكثر من 85% من حالات التهاب المسالك البولية. تهدف هذه الدراسة إلى تحديد جينات مضخة التدفق (acrAB وoqxAB وmarA) التي عُزلت من مجموعة متنوعة من مرضى التهاب المسالك البولية تحت إشراف طبيب مختص في مركزين للرعاية الصحية، هما مستشفى الديوانية التعليمي العام ومستشفى الولادة والأطفال التعليمي في مدينة الديوانية، العراق. بحثت الدراسة في انتشار الإشريكية القولونية المُسببة لالتهابات المسالك البولية، وشملت 200 عينة بول من أفراد مُصابين بالتهاب المسالك البولية، تتراوح أعمارهم بين 5 و62 عامًا، حيث تم فحصها للكشف عن العدوى البكتيرية. تم زراعتها في عينات بول معزولة من 200 مريض يُشتبه بإصابتهم بعدوى المسالك البولية (UTI) باستخدام الدم وآجار ماكونكي، وتم تأكيدها باستخدام نظام Vitek-2. أظهرت نتائجنا أن 50 مريضًا فقط (39%) شُخِّصوا إيجابيًا ببكتيريا الإشريكية القولونية من بين 200 مريض، وأُجري اختبار حساسية للمضادات الحيوية باستخدام النظام نفسه. تُعبَّر جينات مضخة التدفق AcrAB وoqxAB وmarA باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الفعلي (PCR). كشفت الدراسة أن 50 (100%) من عزلات الإشريكية القولونية لديها معدل تعبير جيني oqxAB مرتفع (15.22%)، بينما بلغت نسبتا جيني acrAB وmarA 5.88% و4.03% على التوالي. في الختام، تم الحصول على غالبية عزلات الإشريكية القولونية المدروسة من أفراد يعانون من التهابات المسالك البولية المقاومة للأدوية المتعددة (MDR). اختبار حساسية المضادات الحيوية<br />يُعد نظام Vitek (BioMeneux، تركيا) نظامًا آليًا واسع الاستخدام لإجراء اختبار حساسية المضادات الحيوية (AST) على البكتيريا. فيما يلي لمحة عامة عن البروتوكول، ولكن يُرجى مراجعة دليل جهازك للحصول على تعليمات مفصلة: جهاز Vitek، بطاقة اختبار Vitek مناسبة للبكتيريا المراد اختبارها (مثل بطاقة GN للبكتيريا سالبة الجرام)، مستعمرة بكتيرية معزولة، محلول ملحي معقم، ومعايير McFarland لتوحيد التلقيح.<br /><br />تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي بالنسخ العكسي (RT-qPCR)<br /><br />تم قياس التعبير الجيني لمضخة التدفق لعزلات الإشريكية القولونية المقاومة للأدوية باستخدام طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي في الوقت الحقيقي، مع استخدام جين التدبير المنزلي كمرجع. التزمت الاستراتيجية بالخطوات الموضحة في البحث.<br />استخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي<br />استُخلص الحمض النووي الريبوزي الكلي من عزلات بكتيريا الإشريكية القولونية المقاومة للأدوية المتعددة باستخدام (مجموعات استخلاص الحمض النووي الريبوزي الكلي) باتباع الإجراءات التالية، والتي التزمت بها الشركة المصنعة بدقة وفقًا لتعليمات الشركة المصنعة: بعد حقن 2 ميكروغرام/مل من بروميد الإيثيديوم القابل للتحريض في عزلات بكتيرية في مرق لوريا بيرتاني، وفترة حضانة عند 37 درجة مئوية لتوليد خلايا بكتيرية (OD600:0.8-1.0)، طُرِدَت الخلايا البكتيرية بالطرد المركزي لمدة دقيقة بسرعة 10,000 دورة في الدقيقة، وأُنتج السائل الطافي، الذي جُمِع بعد ذلك. أُضيف (1 مل) من كاشف تريزول إلى حبيبات البكتيريا، ورُكِّبَت بقوة لمدة عشر ثوانٍ في درجة حرارة الغرفة. بعد إضافة 200 ميكرولتر من الكلوروفورم إلى كل أنبوب، رُجَّ الأنبوب بقوة لمدة دقيقة. حُضِّن الخليط في الثلج لمدة خمس دقائق. طُرِدت المحلول بالطرد المركزي لمدة خمس عشرة دقيقة عند 13000 دورة في الدقيقة ودرجة حرارة 4 مئوية. أُضيف 500 ميكرولتر من الأيزوبروبانول إلى أنبوب طرد مركزي دقيق جديد سعة 1.5 مل يحتوي على السائل الفوقي. بعد دمج الخليط، أدر الأنبوب أربع أو خمس مرات واتركه عند 4 مئوية لمدة عشر دقائق. طُرِدت المحلول بالطرد المركزي لمدة عشر دقائق عند 4 مئوية و13000 دورة في الدقيقة.<br /><br />مرة أخرى، تم التخلص من السائل الفوقي، وأُضيف (1 مل) من الإيثانول بنسبة 80% ورُكِّبَ في دوامة. بعد ذلك، طُرِدت المحلول بالطرد المركزي بسرعة 13000 دورة في الدقيقة لمدة 15 دقيقة عند 4 مئوية. تُركت حبيبات الحمض النووي الريبي (RNA) لتجف في الهواء أثناء التخلص من السائل الفوقي. خُزِّنت عينة الحمض النووي الريبي المستخرجة عند درجة حرارة -80 مئوية بعد إذابة حبيبات الحمض النووي الريبي في كل عينة باستخدام 100 ميكرولتر من ماء النوكلياز الحر.<br /><br />بادئات تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي: استخدمت هذه الدراسة تسلسل بنك الجينات التابع لـ NCBI وPrimer3 plus لبناء بادئات تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي للكشف عن جينات مضخة التدفق وتحديد كميتها في عزلات الإشريكية القولونية. صُممت جميع البادئات من قبل شركة الباحث العلمي العراقية باستخدام primer-3 plus.<br /><br />النتائج<br />بلغ إجمالي عدد عينات البول 200 عينة، من مختلف الأعمار والأجناس، حيث أظهرت الدراسة الحالية أن 126 عزلة (63%) أظهرت نتائج تشخيصية إيجابية للإصابة بالبكتيريا من أصل 200 عينة، وأن 50 عزلة (39.7%) مثلت نسبة الإصابة ببكتيريا الإشريكية القولونية. أما النسب المتبقية، فكانت بسبب أنواع أخرى من البكتيريا. أظهرت الدراسة الحالية أن جميع عزلات الإشريكية القولونية مقاومة للمضادات الحيوية وتحتوي على جينات مضخة التدفق. تم تنقية نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل في الوقت الحقيقي لاستخلاص الحمض النووي لعزلات الإشريكية القولونية باستخدام جين gapA.<br />____________<br />جامعة المستقبل الجامعة الاولى في العراق